كارآموزي مؤسسه آفات و بيماري هاي گياهي
بخش علفهاي هرز

مقدمه
وطن اصلی این گیاه آمریکای جنوبی است. درقرن شانزدهم در کشور پرو به مقدر زیاد کشت می‌شده است. در قرن هفدهم گوجه فرنگی به انگلستان و هلند راه یافت. گوجه فرنگی در حال حاضر در تمام مناطق دنیا کشت می‌شود و تقریبا در تمام فصول سال وجود دارد. گوجه فرنگی با نام علمی Solanum lycopersicum یکی از گیاهان متعلق به تیره سیب زمینی از دو لپه‌ایها می‌باشد.

گیاهی است علفی و دارای برگهای مرکب از برگچه‌های فرد نا مساوی که به حالت طبیعی و یا پس از لمس کردن بویی ناپسند و قوی از آن استشمام می‌شود. گلهای آن رنگ مایل به سبز دارد و به صورت منفرد یا به تعداد کم در مجاور هم ظاهر می‌گردد. میوه‌اش گوشت‌دار ، قرمز رنگ و به ابعاد مختلف است و پس از رسیدن رنگ قرمز زیبایی پیدا می‌کند.

ترکیبات شیمیایی
در تمام قسمتهای گیاه ، مقداری سولانین مخصوصا در میوه سبز و حتی در میوه‌ها قبل از رسیدن به تکامل وجود دارد. مقدار درصد سولانین در میوه کال بیشتر از میوه رسیده می‌باشد. گوجه فرنگی کاملا رسیده فاقد سولانین می‌باشد و به همین علت است که اگر گوجه فرنگی به حالت نارس مصرف شود ممکن است عوارض مسمومیت نظیر دل پیچه ، اسهال و باز شدن مردمک چشم ایجاد نماید. میوه گوجه فرنگی سرشار از ویتامینهاست.
خواص دارویی
• گوجه فرنگی درجه قلیایی بودن خون را بالا برده و به دفع مواد سمی خون کمک می‌کند بطور کلی تصفیه کننده خون است.
• به دفع اسید اوریک کمک می‌کند.
• گوجه فرنگی ملین است.
• برای درمان ورم ملتحمه چشم مفید است.
• سنگ کلیه را دفع می‌کند.
• آقایان با خوردن مرتب گوجه فرنگی می‌توانند خود را در مقابل سرطان پروستات بیمه کنند.
• گوجه فرنگی از ورم آپاندیس جلوگیری می‌کند.

• برای رفع دندان درد ، ریشه و شاخه برگهای گوجه فرنگی را با آب بجوشانید و این جوشانده را مزمزه کنید.
• از جوشانده برگ گوجه فرنگی برای دفع شته و حشرات می توانید استفاده کنید. بدین منظور باید یک کیلو گرم برگ تازه گوجه فرنگی را در یک لیتر سرکه خیس کرده و در داخل ظرفی که ۲ لیتر آب جوش دارد بریزید و ظرف را روی چراغ قرار داده و به مدت ۱۵ دقیقه بجوشانید ظرف را از روی چراغ برداشته بگذارید تا مدت دو روز بماند و گاهگاهی آنرا هم بزنید سپس آنرا با فشار صاف کنید.
• گوجه فرنگی برای مبتلایان به نقرس و رماتیسم مفید است.
• گوجه فرنگی ورم مفاصل را برطرف می‌کند.
• از تصلب شرائین جلوگیری می‌کند و حتی مصرف آن برای این مرض مفید است.
• اوره خون را پائین می‌آورد.
• ورم مخاط روده را رفع می‌کند.
• برای تمیز کردن خون باید از آب گوجه فرنگی و کرفس به نسبت مساوی و به مقدار سه فنجان در روز قبل از غذا و به مدت سه هفته استفاده کنید .
• اگر پوست شما کک و مک دارد هر روز آنرا با گوجه فرنگی تمیز کنید کم کم کک و مکها را از بین می‌برد.
گوجه فرنگي از هزاران سال پيش وجود داشته است ولي البته باندازه يك گيلاس بوده است و كم كم در اثر پرورش درشت تر شده است .
وطن اصلي اين گياه آمريكاي جنوبي است . درقرن شانزدهم در كشور پرو به مقدر زياد كشت مي شده است . در قرن هفدهم گوجه فرنگي به انگلستان و هلند راه يافت و چون بسيار گران بود فقط مردم ثروتمند مي توانستند از آن استفاده كنند و بنام سيب عشق معروف شد .
گوجه فرنگي در حال حاضر در تمام مناطق دنيا كشت مي شود و تقريبا در تمام فصول سال وجود دارد گوجه فرنگي انواع مختلف درد و در حدود شانزده نوع آن در بازار بفروش مي رسد .

يك نوع آن گوجه فرنگي سفيد است كه داراي اسيد نمي باشد
گوجه فرنگي را بايد هنگاميكه كاملا رسيده استداز بوته چيد و مصرف كرد زيرا گوجه فرنگي نارس و سبز است و براي بدن مخصوصا كليه ها مضر است البته در كشورهاي صنعتي گوجه فرنگي را كال مي چينند تا هنگاميكه به مقصد مي رسد و يا در انبار مي رسد و قرمز مي شود . اگر گوجه فرنگي كاملا قرمز باشد ولي هنگاميكه آنرا باز مي كنند تخم آن سبز باشد نشانه اين است كه گوجه فرنگي را كال چيده اند و بعدا رسيده است .گوجه فرنگي گياهي است يكساله داراي شاخه هاي زياد كه ارتفاع آن تا حدود يك متر مي رسد
گلهاي آن زرد رنگ است كه از كنار شاخه ها و يا ساقه آن بيرون مي آيد . مويه آن گرد و يا تخم مرغي و برنگ زرد و يا قرمز ديده مي شود .
تركيبات شيميايي:
گوجه فرنگي از هزاران سال پيش وجود داشته است ولي البته باندازه يك گيلاس بوده است و كم كم در اثر پرورش درشت تر شده است .
وطن اصلي اين گياه آمريكاي جنوبي است . درقرن شانزدهم در كشور پرو به مقدر زياد كشت مي شده است . در قرن هفدهم گوجه فرنگي به انگلستان و هلند راه يافت و چون بسيار گران بود فقط مردم ثروتمند مي توانستند از آن استفاده كنند و بنام سيب عشق معروف شد .

گوجه فرنگي در حال حاضر در تمام مناطق دنيا كشت مي شود و تقريبا در تمام فصول سال وجود دارد گوجه فرنگي انواع مختلف درد و در حدود شانزده نوع آن در بازار بفروش مي رسد .
يك نوع آن گوجه فرنگي سفيد است كه داراي اسيد نمي باشد
گوجه فرنگي را بايد هنگاميكه كاملا رسيده استداز بوته چيد و مصرف كرد زيرا گوجه فرنگي نارس و سبز است و براي بدن مخصوصا كليه ها مضر است البته در كشورهاي صنعتي گوجه فرنگي را كال مي چينند تا هنگاميكه به مقصد مي رسد و يا در انبار مي رسد و قرمز مي شود . اگر گوجه فرنگي كاملا قرمز باشد ولي هنگاميكه آنرا باز مي كنند تخم آن سبز باشد نشانه اين است كه گوجه فرنگي را كال چيده اند و بعدا رسيده است .گوجه فرنگي گياهي است يكساله داراي شاخه هاي زياد كه ارتفاع آن تا حدود يك متر مي رسد

گلهاي آن زرد رنگ است كه از كنار شاخه ها و يا ساقه آن بيرون مي آيد . مويه آن گرد و يا تخم مرغي و برنگ زرد و يا قرمز ديده مي شود .
خواص داروئي:
گوجه فرنگي گر چه داراي اسيد سيتريك است اما بدن را قليايي مي كند
۱)گوجه فرنگي درجه قليايي بودن خون را بالا برده و به دفع مواد سمي خون كمك مي كند بطور كلي تصفيه كننده خون است
۲)به دفع سايد اوريك كمك مي كند
۳)گوجه فرنگي ملين است
۴)براي درمان ورم ملتحمه چشم مفيد است
۵)سنگ كليه را دفع مي كند
۶)آقايان با خوردن مرتب گوجه فرنگي مي توانند خود را در مقابل سرطان پروستات بيمه كنند
۷)گوجه فرنگي از ورم آپانديس جلوگيري مي كند
۸)براي رفع دندان درد ، ريشه و شاخه برگهاي گوجه فرنگي را با آب بجوشانيد و اين جوشانده را مضمضه كنيد .

۹)از جوشانده برگ گوجه فرنگي براي دفع شته و حشرات مي توانيد استفاده كنيد . بدين منظور بايد يك كيلو گرم برگ تازه گوجه فرنگي را در يك ليتر سركه خيس كرده و در داخل ظرفي كه ۲ ليتر آب جوش درد بريزيد و ظرف را روي چراغ قرار داده وبمدت ۱۵ دقيقه بجوشانيد ظرف را از روي چراغ برداشته بگذاريد تا مدت دو روز بماند و گاهگاهي آنرا هم بزندي سپس آنرا با فشار صاف كنيد
۱۰)گوجه فرنگي براي مبتلايان به نقرس و رماتيسم مفيد است
۱۱)گوجه فرنگي ورم مفاصل را برطرف مي كند
۱۲)از تصلب شرائين جلوگيري مي كند و حتي مصرف آن براي اين مرض مفيد است
۱۳)اوره خون را پائين مي آورد

۱۴)ورم مخاط روده را رفع مي كند
۱۵)براي تميز كردن خون بايد از آّ گوجه فرنگي و كرفس به نسبت مساوي و بمقدر سه فنجان در روز قبل از غذا و بمدت سه هفته استفاده كنيد .
۱۶)براي تميز كردن لكه جوهر بر روي لباس يك تكه پنبه را در داخل آب گوجه فرنگي برده و لكه جوهر را با آن مالش دهيد و سپس آنرا بشوئيد
۱۷)اگر پوست شما كك و مك درد هر روز آنرا با ّآ گوجه فرنگي تميز كنيد كم كم كك و مكك ها را از بين مي برد
مضرات :
در بعضي از اشخاص هضم گوجه فرنگي با اشكال صورت مي گيرد آنهائيكه معده حساس دارند نبايد درخوردن گوجه فرنگي افراط كنند .
بعضي از افراد نسبت به گوجه فرنگي حساسيت دارند اينگونه افراد نيز نبايد گوجه فرنگي بخورند
گوجه فرنگی

نحوه استفاده : به شیوه های مختلف در غذا مصرف میشود
خواص : گوجه فرنگي Tomato
نام علمی Lycopersicum esculentum
كليات گياه شناسي
گوجه فرنگي از هزاران سال پيش وجود داشته است ولي البته باندازه يك گيلاس بوده است و كم كم در اثر پرورش درشت تر شده است .
وطن اصلي اين گياه از آمريكاي جنوبي است . درقرن شانزدهم در كشور پرو به مقدر زياد كشت مي شده است . در قرن هفدهم گوجه فرنگي به انگلستان و هلند راه يافت و چون بسيار گران بود فقط مردم ثروتمند مي توانستند از آن استفاده كنند و بنام سيب عشق معروف شد .
گوجه فرنگي در حال حاضر در تمام مناطق دنيا كشت مي شود و تقريبا در تمام فصول سال وجود دارد گوجه فرنگي انواع مختلف دارد و در حدود شانزده نوع آن در بازار بفروش مي رسد .
يك نوع آن گوجه فرنگي سفيد است كه داراي اسيد نمي باشد
گوجه فرنگي را بايد هنگاميكه كاملا رسيده است از بوته چيد و مصرف كرد زيرا گوجه فرنگي نارس و سبز است و براي بدن مخصوصا كليه ها مضر است البته در كشورهاي صنعتي گوجه فرنگي را كال مي چينند تا هنگاميكه به مقصد مي رسد و يا در انبار مي رسد و قرمز مي شود . اگر گوجه فرنگي كاملا قرمز باشد ولي هنگاميكه آنرا باز مي كنند تخم آن سبز باشد نشانه اين است كه گوجه فرنگي را كال چيده اند و بعدا رسيده است .

گوجه فرنگي گياهي است يكساله داراي شاخه هاي زياد كه ارتفاع آن تا حدود يك متر مي رسد
گلهاي آن زرد رنگ است كه از كنار شاخه ها و يا ساقه آن بيرون مي آيد . مويه آن گرد و يا تخم مرغي و برنگ زرد و يا قرمز ديده مي شود .
خواص داروئي:
گوجه فرنگي گر چه داراي اسيد سيتريك است اما بدن را قليايي مي كند
۱)گوجه فرنگي درجه قليايي بودن خون را بالا برده و به دفع مواد سمي خون كمك مي كند بطور كلي تصفيه كننده خون است
۲)به دفع سايد اوريك كمك مي كند
۳)گوجه فرنگي ملين است
۴)براي درمان ورم ملتحمه چشم مفيد است
۵)سنگ كليه را دفع مي كند
۶)آقايان با خوردن مرتب گوجه فرنگي مي توانند خود را در مقابل سرطان پروستات بيمه كنند
۷)گوجه فرنگي از ورم آپانديس جلوگيري مي كند
۸)براي رفع دندان درد ، ريشه و شاخه برگهاي گوجه فرنگي را با آب بجوشانيد و اين جوشانده را مضمضه كنيد .
۹)از جوشانده برگ گوجه فرنگي براي دفع شته و حشرات مي توانيد استفاده كنيد . بدين منظور بايد يك كيلو گرم برگ تازه گوجه فرنگي را در يك ليتر سركه خيس كرده و در داخل ظرفي كه ۲ ليتر آب جوش دارد بريزيد و ظرف را روي چراغ قرار داده وبمدت ۱۵ دقيقه بجوشانيد ظرف را از روي چراغ برداشته بگذاريد تا مدت دو روز بماند و گاهگاهي آنرا هم بزنديد سپس آنرا با فشار صاف كنيد
۱۰)گوجه فرنگي براي مبتلايان به نقرس و رماتيسم مفيد است
۱۱)گوجه فرنگي ورم مفاصل را برطرف مي كند
۱۲)از تصلب شرائين جلوگيري مي كند و حتي مصرف آن براي اين مرض مفيد است
۱۳)اوره خون را پائين مي آورد
۱۴)ورم مخاط روده را رفع مي كند
۱۵)براي تميز كردن خون بايد ازآب گوجه فرنگي و كرفس به نسبت مساوي و بمقدر سه فنجان در روز قبل از غذا و بمدت سه هفته استفاده كنيد .
۱۶)براي تميز كردن لكه جوهر بر روي لباس يك تكه پنبه را در داخل آب گوجه فرنگي برده و لكه جوهر را با آن مالش دهيد و سپس آنرا بشوئيد
۱۷)اگر پوست شما كك و مك درد هر روز آنرا با آب گوجه فرنگي تميز كنيد كم كم كك و مک ها را از بين مي برد
تاریخ شروع ۷/۱۲/۸۵ با اتوکلاو خاک و کشت گوجه فرنگی در گلخانه

۱۲/۸۵/۱۲ ساخت محیط کشت نیمه تعریف شده با دز موادی که در جدول ذکر شده با کمک ترازوی دقیق میکرو پیپت ، شیکر تک لوله و …………………………
ترکیب یک محیط کشت مایع نیمه تعریف شده برای تولید انبوه اسپور؛
نام ماده مقدار در لیتر

۲ گرم

۴/۰ گرم

۳/۰ گرم

۳۷ میلی گرم

۵۰ میلی گرم

۱۶ میلی گرم

۱۴ میلی گرم
Thiamine , riboflavin , pantothenate , niacin ,pyridoxamine , thiotic acid. از هر یک ۵۰۰ میکرو گرم
Folic acid , biotin , vitamin B
از هر یک ۵۰ میکروگرم
Glucose  منبع کربن
Casamino acids  منبع نیتروژن

مقدار کربن و نیتروژن بسته به قارچ و رژیم غذایی مورد نظر محاسبه می شود

C:N ratio Casamino acid gl-1 Glucose 20%(W/V)mll-1
40:1 0.6 46
15:1 1.8 39

۵:۱ ۴٫۹۶ ۱۷٫۵

. …..
در مرحلهء اول آزمایش هدف مشاهدهء میزان اسپورزایی دو ایزوله در محیط های متفاوت است پس بعد از ساخت این محیط های با کمک دستگاهpH کشت
pH مخصوص اینکار تعیین
می کنیم و روی ظرف یادداشت می کنیم
۲۱/۱۲/۸۵ جمع آوری ظروف پتری دیش و اتوکلاوآنها

همین طور اتوکلاو خاک
در تاریخ ۲۲/۱۲/۸۵ شرو ع مرحلهء ۱ آزمایش با کشت دان دو ایزولهء قارچ که با دو کد ۶ و ۲ نام گذاری شدند
تیمارها (۵، ۵/۵ ،۶ ،۵/۶ ،۱۵/۷) پس ۵ تیمار داریم و برای هر تیمار ۴ تکرار pH
چون دو ایزوله داریم در مجموع ۴۰ پتری دیش در آزمایش پر می شود
یعنی ۴۰ کرت، با شروع آزمایش، خطای دید موجب شد یکی از پتری دیشها
اشتباه شده و حذف شود .بنابراین ما یک کرت از دست رفته داریم که باید به روشی دیگر برآورد شود.
ایزولهء اشتباه شده از ۵/۶ ایزولهء ۲ حذف شد
پس ۳۹ کرت در جای خودشان در شیکر قرار گرفتند

۲۳/۱۲/۸۵ نمونه ها باز بینی شد اسپوری تولید نشده بود
۲۵/۱۲/۸۵ نمونه ها با کمک لام و لامل معمولی سنجش اسپور شد
فقط به این منظور که ببینیم آیا اسپور دهی در آنها رخ داده و حاوی اسپور شده
اند یا نه؟و نتایج به شکل جدول رسم شد
.مربوط به ایزولهء ۶
۵ ۵٫۵ ۶ ۶٫۵ ۷٫۱۵
۱ خیلی کم خیلی کم ۰ زیاد خیلی زیاد+
۲ خیلی کم ۰ متوسط زیاد خیلی زیاد_
۳ خیلی کم خیلی کم متوسط زیاد خیلی زیاد_
۴ خیلی کم ۰ ۰ زیاد خیلی زیاد+
مربوط به ایزولهء ۲

 

 

۵ ۵٫۵ ۶ ۶٫۵ ۷٫۱۵
۱ ۰ ۰ ۰ متوسط متوسط
۲ ۰ ۰ ۰ متوسط متوسط_
۳ ۰ ۰ ۰ متوسط+ خیلی زیاد
۴ ۰ ۰ ۰ ازدست
رفته زیاد
های بالا فعال تر است تا پایین pH مشاهده شد اسپور زایی در هر دو ایزوله در

همین طور اسپورزایی در روز سوم در ایزولهء ۶ بیشتر از ۲ بوده پس سرعت بالاتری نسبت به ایزولهء ۲ تا به حال داشته نحوهء تعیین میزان اسپور هر ایزوله با صفت هایی مثل؛
۰-خیلی کم-کم-متوسط-زیاد-خیلی زیاد

اما شمارش اسپورموکول شد به روز یک شنبه ۲۷/۱۲/۸۵ یعنی ۴روز بعد از کشت با کمک همو سایتومتر که لام مدرج است
اسپورهای شمارش شده در مربع بزرگ در۱۰۰۰۰ ضرب می شوند
اسپورهای موجود در مربع های متوسط داخل مربع اصلی در ۲۵۰۰۰۰ ضرب
می شوند
اکثرا شمارش در مربع های خیلی کوچک مختص شمارش اسپور قارچ ها نیست بلکه اکثرا برای شمارش باکتری ها به کار میروند در صورت شمارش رقم شمرده شده در ۴۰۰۰۰۰۰ ضرب می شود

قسمت مدرج
۲۵/۱۲/۸۵ در شمارش اسپور این طور معلوم شد
تعداد اسپور ها در دو ایزوله پس از شمارش سه خانهء کوچک از هموسایتومتر و معدل گیری آنها سپس جمع اعداد بدست آمده در زیر هم در یک ستون و معدل گیری کلی تکرارها و بعد ضرب عدد نهایی در ۲۵۰۰۰۰ جهت محاسبهء نهایی تعداد اسپورها

در ابتدای اسپوردهی سرعت اسپوردهی در ایزولهء ۶ بیشتر از ایزولهء ۲ بود اما با گذشت زمان کارایی ایزولهء ۲ نیز در اسپور دهی بالا رفت سرعت اسپوردهی هر دو ایزوله درHPهای بالا بیشتر از پایین است و آزمایش نشان داد اسپور دهی دو ایزوله در HP بالا کار آمدتراست
تاریخ کشت ایزوله ها ۲۲/۱۲/۸۵ بود و تاریخ شمارش ۲۸/۱۲/۸۵ (تعداد اسپوردر میلی متر)
مرحلهء دوم آزمایش در تاریخ ۲۹/۱۲/۸۵ با ساخت محیط کشت ۱۵:۱ شبیه محیط قبلی شروع شد

این بار محیط کشت علاوه بر مواد قبلی درصدی هم در هر تیمار گلیسرول داشت درصد گلیسرول که تیمار ما در نظر گرفته شد به ترتیب ۰%و۲%و۵%و۷% بودکه در ساخت محیط کشت با در نظر گرفتن این مطلب که در آزمایش قبل بهترین پ هاش برای اسپورزایی دو ایزوله ۷٫۱۵ بود بنابراین در این آزمایش هم پ هاش محیط ثابت در هر تیمار ۷ در نظر گرفته شد پس از ساخت محیط های کشت در پتری دیش در بسته اتوکلاو شد و آمادهء انتقال به ظرفهای پتری دیش و کشت دادن قارچ در آنها شد
در تاریخ۱/۱/۸۶ به اندازهء ۵۰ میلی از هر محیط کشت داخل یک پتری دیش ریخته شد اطلاعات به این شکل روی هر پتری دیش ثبت شد که ایزولهء فرضا ۲ گلیسرول ۰% و تاریخ کشت آن ایزوله برای هر درصد ایزوله ۴ تکرار در نظر گرفته شد ۴تکرار و ۴ درصد از ایزوله پس رویهم برای هر ایزوله ۱۶ کرت یا پتری دیش و برای دوتای آنها ۳۲ پتری دیش اتوکلاو و از محیط کشت مورد نظر پر شد در همین تاریخ ۱/۱/۸۶ پس از فیلتر کردن و استخراج اسپورها از محیط کشت قبلی دو ایزوله در پ هاش های ۷٫۱۵
با انجام محاسباتی که فرمول آنها ذکر می شود سنجیده شد که اسپور فیلتر شده

که غلظتش در زیر همو سایتومتر بررسی شد چه مقدار به محیط ما افزوده شود تا کشت صحیح انجام شود

پس از محاسبه در تاریخ یکم کشت ایزولهء ۲ و در تاریخ ۲/۱/۸۶ کشت ایزولهء ۶ انجام گرفت سپس در شیکر قرار گرفت تا در تاریخ ۵/۱/۸۶ دوباره هر محیط اسپور شماری شود.

پس از شمارش اسپورهای هر تکرار ایزوله
شواهد حاکی از این مطلب است که هر دو ایزوله در درصد گلیسرول های ۲و ۵ کارایی بالاتری نسبت به سایر درصدها داشته و اسپورزایی بیشتری خواهند داشت
۱۱/۱/۸۶ روز شنبه پس از شستن ظروف به جا مانده از روز قبل
های محیط کشت(۱۵:۱) با pH
ساخته شد.۶/۵,۷,۷/۵,۸
برای هر تیمار ۴ تکرار در نظر گرفته انتخاب این ۴ پ هاش با توجه به نتایج حاصل از آزمایشات قبل بود.
۱۲/۱/۸۶ یک شنبه
در۳۲ پتری دیش برای دو ایزوله از محیط کشت ریخته شد سپس کشت دادن دو ایزوله ء قارچ

در آنها صورت گرفت با بهره گیری از سوسپانسیون دو ایزوله که از قبل تهیه کرده بودیم و فیلتر کردن آنها جهت حذف میسلیوم های قارچ( چراکه دو سوسپانسیون ایزوله مدتی ثابت بیرون از شیکر مانده بودند پس میسلیوم دار شده بودند)اسپور قارچ گرفته و به مقدار به کار گرفته شده در آزمایش قبلی یعنی برای ایزولهء۲ _۲۲۵ میکرولیتر و برای ایزولهء ۶ _ ۴۴ میکرولیتر با کمک میکرو پیپت در هر پتری دیش حاوی محیط کشت ریختیم.پس از انجام عمل کشت هر ۳۲ پتری دیش برای اسپورزایی روی شیکر قرار گرفت.

(اسپور گیری باید از اسپورهای جدید حاصل از آزمایش محیط کشت حاوی گلیسرول انجام می شد اما به علت بی دقتی ایزولهء ۶ از بین رفت بنابراین ایزولهء ۲ هم کنار گذاشته شد و از اسپورهای آزمایش قبل با فیلتر مجدد استفاده شد).

در تاریخ ۱۵/۱/۸۶ شمارش اسپور با کمک همو سایتومتر انجام شد که جواب بسیار نا امید کننده بود تعداد اسپورها در هر دو ایزوله به قدری کم بود که قابل ذکر نبود بنابراین دوباره پتری دیش ها روی شیکر قرار گرفت (علت این کمی اسپور دهی و سرعت بسیار کم اسپور د

هی دمای پایین آزنایشگاه در این تارخ فرض شد)در همین تاریخ در ۱۷ گلدان حسن یوسف درخاک های استریل کاشته و آبیاری شد .

در تاریخ ۱۷/۱/۸۶ روز جمعه کشت۱۵ گلدان دیگر حسن یوسف و واکاری گلدانهای حسن یوسف و نشاء ۴ عدد از گیاهچه های ۴ برگی شدهء گوجه فرنگی انجام شد

روز یکشنبه ۱۹/۱/۸۶ بذر گل جالیز در کنار ریشهء گیاهچه های گوجه فرنگی و حسن یوسف ریخته شد.سپس شمارش اسپور با کمک هموسایتومتر انجام گرفت
نتیجهء این آزمایش نشان داد هر دو ایزوله در پ هاشهای بالا ۷٫۵ و ۸ اسپوردهی کمتری ۲۵/۱/۸۶ شنبه تهیهء بذور با ارزش در کشور، نیز تهیهء خاک استریل ،
۲۶/۱/۸۶ساخت محیط ۱۵:۱ با بهره گری از نتایج مراحل قبلی آزمایش به این
ترتیب::
۱٫بهترین درصد گلیسرول محاسبه شده یعنب ۲درصد و ۵ درصد مدنظر قرار
گرفت
۲٫ همچنین بهترین پ هاش محاسبه شده برای هر دو ایزوله ۶٫۵ قرار داده شد
درنتیجه محیط کشت ای شبیه محیط کشت های قبلی با نسبت کربن به نیتروژن ۱۵:۱ ساخته شد با این تفاوت که پ هاش همه را در ۶٫۵ تنظیم و گلیسرول را در یک سری از فلاسک ها ۰ در نظر گرفتیم یعنی تیمار شاهد و در یک سری ۵ درصد.۵ درصد گلیسرول به معنی نسبت ۵ به ۱ یعنی اگر ۱ لیتر برای هر ایزوله محیط کشت ساخته شد محیط کشتی که قرار بود ۵ درصد گلیسرول داشته باشد می بایسن با گرفتن یک تناسب ۵۰۰۰۰ماکرو لیتر با میکروپیپت به آن
گلیسرول اضافه می کردیم یعنی به اندازهء ۵ درصد یک لیتر.
قرار بود آزمایش با دو تیمار ذکر شده با ده تکرار انجام شود اما شیکر پر بود بنابراین ادامهء کار به تعویق افتاد پس بنا شد تا زمان خالی شدن شیکر محیط کشت دیگری به نام محیط کشت ریچارد ساخته شود که در نتیجه مراحل
آزمایش تغییر یافت
دوشنبه ۲۷/۱/۸۶ در ادامهء کار ساخت محیط کشت ریچارد که محیط کشت
ارزانتری است انجام شدو پس از اتوکلاو شدن نگه داشته شد.
در محیط کشت فقیرتر طبق بیانات استاد اسپورزایی بیشتر است بنابراین این مرحله از آزمایش را جهت مقایسهء دو محیط کشت در حین انجام آزمایش تحمل به خشکی دو ایزوله انجام می دهیم.درکشت دو ایزوله در دو محیط کشت یکی حاوی محیط نیمه تعریف شده ۱۵:۱ و دیگری در محیط کشت ریچارد یک نتیجهء مهم اقتصادی نیز خواهد داشت.چنانکه خواهیم دانست که آیا اسپورزایی در هر دو محیط کشت به یک حد است یا خیر اگر اسپورزایی در هر دو محیط به یک میزان بود به صرفه است در تولید بالای میکوهربیساید از محلول ریچارد که نیجهء خوبی هم دارد و به صرفه تر است بهره بگیریم تا در مقیاس بزرگتر تولید
به صرفه تری داشته باشیم.
ترکیبات محیط کشت محلول ریچارد
فرمول مادهء شیمیایی مقدار دریک لیتر
نیترات پتاسیم
۱۰ گرم
دی هیدروژن پتاسیم ۵ گرم
سولفات مگنزیوم ۲٫۵ گرم
کلرور آهن
۲۰ میلی گرم
دی- گلوکز
۵۰ گرم

فرمول ترکیبات محلول ریچارد که به جز مواد و مقدار ترکیباتش در طرز ساخت شبیه همان محیط کشت ۱۵:۱ است به این ترتیب که مواد و ترکیبات راکه برای
دو لیتر محاسبه کردیم
به همان شکل با ترازوی دقیق برقی وزن کرده سپس در دو لیتر آب مقطر با گذاشتن بر روی دستگاه گرم کن چرخان (مغناطیسی به کمک مگنتیت) حل می کنیم همچنین یک لیتر محلول با گلیسرول ۵ درصد و لیتر دیگر ۰ درصد درست شد مثل محیط نیمه تعریف شده سپس به کمک پ هاش سنج دقیقا مثل مراحل قبل پ هاش را اندازه گیری کرده و با کمک یا اسید هیدروکلرید ریک یا به کمک سود یا همان هیدروکسید سدیم پ هاش مد نظر را ایجاد میکنیم که در این مرحله پ هاش مدنظر ما ۶٫۵ بود(باید ذکر کرد قبل از تغییر پ هاش ها اکثر محیط های کشت پ هاشی اسیدی و نزدیک به ۵ یا ۵٫۵ دارند پس بیشترین استفاده از همان محلول سود است که ۱ درصد بوده و با ترکیب ۴ گرم سدیم در ۱۰۰ میلی لیتر
آب تهیه می شود)
در این حالت با داشتن دو نوع محیط کشت با دو نوع درصد گلیسرول ۴ تیمار داریم و برای هر تیمار هم ۴ تکرار در نظر میگیریم که در نتیجه برای هر ایزوله ۱۶ فلاسک و برای دوتا ۳۲ فلاسک استریل لازم است .و برای افزودن اسپور قارچ هم با فیلتر کردن از اسپور قارچ مرحلهء قبل اسپور برداشت میکنیم فیلتر کردن با کمک دستمال فیلتر و قیف که هر دو از قبل استریل شده اند انجام می گیرد که پس از فیلتر کردن یک قطره روی هموسایتومتر گذاشته شده غلظت اسپورش در زیر

میکروسکوپ سنجیده شده و پس از محاسبه برای کشت در هر فلاسک غلظتش تعیین میشود غلظت ای است که ما مدنظر داریم که اسپور در هر فلاسک بریزیم پس به اضافه می کنیم همان نسبت بسته به میزان اسپور از
هر ایزوله به میزان.
c1v1=c2v2 فلاسک ها اسپور اضافه میکنیم با فرمول
۲۷/۱/۸۶ دوشنبه جهت انجام مرحلهء تعیین دامنهء میزبانی شروع به آماده کردن
گلدان ها و خاک برای کشت کردیم
در این تاریخ گلدانهای یک کیلویی که تعداد آنها۱۶۰ عدد بود در وایتکس ضد
عفونی و سپس خشک شد.

گلدان های خشک شده از خاک استریل تهیه شده پر شد سپس روی هر گدان نام گیاهی که قرار بود در آن کشت شود با ذکر شمارهء تکرار یادداشت و چسبانده شد در کنار هر گیاه با ۵ تکرار برای اسپورپاشی قارچ ۵ تکرار هم از شاهد قرار
داده شد که قرار است به همان اندازه و در همان زمان آب پاشی شوند.

لیست گیاهانی که کشت شدند به شرح زیر بود:
به تعداد ۱۶ گیاه و هر کدام با روش خاصی مثلا تک لپه ای ها اول به مدت دو روز خیسانده شدند بذور دو لپه هم کشت شدند در هر گلدان ۵ تا ۶ بذر از بذر های درشت تر قرار داده شد و به اندازهء یک بند انگشت یا دو برابر قطر خود
بذر در خاک فرو داده شد.
برخی از بذور مثل پنبه پرز گیری شد به کمک اسید سولفوریک ۱ درصد سپس کشت شد به سبب از بین بردن خواب بذر و پوشش آن برای افزایش سرعت جوانه زنی.برخی بذور خیلی ریز مثل تنباکو روی سطح خاک پاشیده شد و
دوباره روی سطح آن با خاک پوشانده شد .
آبیاری این بذور با آبپاش مخصوص که مانع به هم خوردن بذرها در خاک و
جابه جایی آنها می شود انجام می گیرد.
نام رقم کشت شده نام علمی گیاه نام گیاه به انگلیسی نام گیاه به فارسی
گل آذین Helianthus annuus L. Sun flower آفتابگردان
بومی اصفهان پاکان بذر Carthamus tinctorius L. safflower گلرنگ
گرگان Glycine max Merrill Soy bean سویا
موسسهء چغندر فریمان Beta vulgaris saccharifera L. Sugar beet چغندر قند
الوند Triticum aestivum L. wheat گندم نان
N.rastica Nicotiana persica tobacco تنباکو

Ps Cucumis sattivus cucumber خیار
Ps Lycopercicom esculentum tomato گوجه فرنگی
Singlecross704 Zea mays L. corn ذرت
کرمانشاه Cicer arietinum L. pea نخودزراعی
پاکان بذر Onobrychis sativa spers اسپرس زراعتی

کارون و کویر Hordeum vulgare L. barley جو
P.vulgaris Phaseolus calcaratus Kidney bean لوبیا قرمز
پاکان بذر Brassica napus L. Rape seed کلزا
ورامین Gossypium hirsutum L. cotton پنبه فاریاب
نیک شهری Medicago sativa L. alfalfa یونجه

سه شنبه ۲۸/۱/۸۶ آماده کردن و پر کردن یک سری دیگر از گلدانها و پر کردن
از خاک برای نشاء گوجه فرنگی ها همراه گل جالیز
۲۹/۱/۸۶ آب دادن گلدان ها
۱/۲/۸۶ شنبه کاشت گلدانها و آب دادن
دوشنبه ۳/۲/۸۶ کاشت نشاء های گوجه فرنگی که ریشهء آنها به گل جالیز آغشته
شده
پنج شنبه ۶/۲/۸۶ پر کردن فلاسک ها از محیط کشت های استریل نیمه تعریف شده و ریچارد با نسبتهای گلیسرول ۰ و ۵ درصد با پ هاش معین ۶٫۵ در همهء فلاسک ها با تکرار ۴ برای هر تیمار سپس کشت دو ایزوله در دو نوع محیط
۴ تیمار در ۴ تکرار ۱۶ فلاسک برای هر ایزوله و برای دو ایزوله ۳۲ فلاسک

مراحل کشت دو ایزوله :
تهیهء سوسپانسیون از هر ایزوله شمارش اسپورهای ایزوله های فیلتر شده جهت تعیین غلظت در فلاسکها پس از شمارش اسپور اسپورآنهاو
رساندن میانگین اسپورها بود که در فرمول گذاشته شد

برای هر فلاسک۸۰ ماکرولیتر از سوسپانسیون ریخته می شود با دقت و در محیط استریل زیر هود پس از تهیهء سوسپانسیون دو ایزوله با در نظر گرفتن حجمهای صحیح از هر ایزوله کشت در هر فلاسک که حاوی ۱۰۰ میلی لیتر